대학 과제 및 리포트85 DNA Hybridization (DNA 혼성화) 1. DNA Hybridization (DNA 혼성화) 서로 다른 두개의 핵산가닥이 상보적 결합을 형성하는 것 pH, 온도, salt 에 따라 결합되는 정도가 달라진다. 두 가닥내의 인산기 사이에 정전기적 반발이 없어질 정도로 염의 농도가 높아 야 한다. 대개 0.15-0.50M NaCl이 사용된다. 온도는 한 가닥 내에서 이루어지는 임의의 수소결합이 다시 파괴될 정도로 높아야 한다. 그러나 너무 높아서도 안되고, 가닥간의 안정된 염기쌍이 이루어질 정도로 낮아서도 안된다. 재생을 위한 최적온도는 Tm보다 20-25℃ 낮아야 한다. 재생속도는 나선이 다시 꼬이는 시간에 의하여 좌우되는 것이 아니라, 상보적인 두 가닥 사이에서 염기쌍이 정확하게 일어날 수 있도록 두 가닥이 접근할 수 있는 확률에 의존한다. .. 2010. 3. 17. 계배(Chick embryo) 발생 난모세포가 난단백이 그 주위에 축적되기 전에 수란관 상부에서 수정한다. 몇 개의 정자가 배반에 침입하나 한 정자만이 수정 과정에 관여하고 나머지는 곧 사멸하는데, 그들의 핵은 소실되기 전에 몇 번 분열을 한다. 정자가 침입한 직후에 난자는 두 성숙분열을 하고 그 극체는 곧 퇴화한다. 극단적으로 많은 난황을 가진 이런 알에서는 필연적으로 난할이 배반에 국한되며, 결국 배반엽을 만들게 된다. 난할은 국할인 반할이다. 난할은 수정이 완료된 후 곧 시작하며, 알이 수란관을 내려가는 동안 계속한다. 이것은 보통 12 내지 16시간 걸린다. 산란될 때는 포배기의 알인데, 만약 산란이 늦어진다면 그 이상으로 더 발생이 진행할 것이다. 접합핵의 제 1차 분열에 이어 제 1난할구의 형성이 일어난다. 이 난할은 배반을 바.. 2010. 3. 9. UvrABC mutaion e-coli의 UV에 의한 DNA손상과 DNA Repair 튜브7중1개는 LB 800람다 넣고 나머지는 900람다넣음 800람다넣은곳에샘플200람다 볼텍싱한뒤 100람다를 따서 다른 배지가 있는 튜브에 넣는다 7번째튜브까지희석 100람다 따서 플레이트에 뿌린뒤 로딩. 자외선의 세기와 시간을 다르게 해서 대장균에 자외선 쬐여주기 배양후관찰 이번 실험은 uv에 의한 e-coli의 dna손상에 대한 실험이었다. uv는 0J, 5J, 10J, 25J, 50J, 100J 로 나누어 실험 하였다. 배지로 계속 희석시켜주는것은 e.coli의 수를 줄여 counting 하기 쉽게하기 위해서이다. uv는 돌연변이원(mutagen)으로써 thymine 과 인접 thymine의 공유 결합을 형성하여 thymine dymer를 형성한다. 따라서 DNA polymerase가 읽을 때 .. 2009. 12. 11. Natural killer cell cytotoxicity 원문 자연 살상 세포 세포독성 작용: 어떻게 방아쇠를 당기는 것일까? 요약 자연 살상 세포(NK cell)는 바이러스에 감염되거나 발암성인 세포를 포함해 비정상적인 세포를 목표로 하고 살상한다. 그러한 살상은 분비성 용해소체 내에 저장되며 NK 세포 내의 특수한 세포독성 세포기관에서 발견되는 세포독성 분자에 의해 중재된다. 목표 세포의 인지는 NK 세포와 목표 세포간의 용해성 면역 시냅스의 형성을 유도한다. 이 때 분비성 용해소체의 분극화된 세포외유출 작용이 활성화되며 이러한 세포 기관들은 목표 세포를 살상하는 자신의 세포독성 내용물을 용해성 시냅스에서 방출한다. 분비성 용해세포 세포독성 작용이 NK 세포의 세포독성 기능에서 수행하는 필수적인 역할은 세포외유출 메커니즘의 절대적 요소의 돌연변이에 의해 발.. 2009. 12. 8. 돌연변이원(mutagen) ▶Chemical mutagens 돌연변이 원으로서 알려진 많은 화학물질 중의 하나는 nitrous acid이다. Figure 8.17은 DNA가 nitrous acid에 노출되었을 때 Adenine의 base pair가 Thymine대신 Cytosine으로 전환되는 방법을 나타낸다. 변형된 Adenine을 가진 DNA가 복제되면 하나의 daughter DNA는 그의 parent DNA와는 다른 base pair sequence를 갖게 된다. 결국 granddaughter cell에서는 일부 A-T base pair가 G-C base pair로 바뀔 것이다. nitrous acid는 DNA의 특정한 base pair를 변화시킨다. 모든 돌연변이 원과 같이 nitrous acid는 무작위적 위치에서 DNA.. 2009. 12. 3. plasmid DNA preporation plasmid DNA preporation cell 80ul를 e-tube에 준비 centrifuge 14000RPM 5min 상층액 제거 pellet에 sol.1 200ul add. 상온 5min 고루 섞이도록 vortex 후 상온 5min sol.2 400ul add inverting 15회 상온 5min sol.3 300ul add inverting 15회 상온 5min centrifuge 14000RPM 10min 4'c 상층액을 다른 tube로 900ul옮긴다 isopropanol 600ul add 상온 5min centrifuge 14000RPM 15min 4'c 상층액 제거 70% EtOH 1ml add centrifuge 14000RPM 10min EtOH 제거 overdry TDW+RNa.. 2009. 12. 2. Electrophoresis, buffer 전기영동이란, 용액에 전류를 통했을때 용액중의 하전입자가 양극 또는 음극으로 이동하는 현상을 말하며, 전압의 차이가 발생한 field에서 음전하를 띤 입자는 양극(anode) 을 향해 이동하고 , 양전하를 띤 입자는 음극(cathode)을 향해 이동한다. 전기영동은 주로 단백질 관련 물질 또는 유사한 성질을 가진 물질이 대상이 된다. 단백질은 1차구조인 amino산이 acidic carboxyl group과 basic amino group을 가지고 있으며, 같은수의 양전 하와 음전하를 가지고 있는 상태인 순전하(net charge)는 전기적으로 중성이므로, 전장 (electric field)에서 움직이지 않는다. 그러나 아미노산이 용매중의 물과 반응하면 amino group은 alkali성을 띠고, ca.. 2009. 11. 25. bacteria 의 transformation introduction transformation은 유전자가 삽입된 플라스미드 vector를 대장균세포속으로 도입하는 과정이다. 형질전환이 연구는 그리피스의 죽은 병원성 폐렴쌍구균의 DNA가 비병원성 폐렴쌍구균을 병원성으로 전환시키는것을 확인한 실험에서부터 시작되었다. 형질전환은 small DNA보다 large DNA 의 효율이 떨어지며 DNA의 양이 너무 많아도 좋지 않으므로 적당한 길이와 적당한 양의 DNA를 사용하는것이 중요한 요소이다. natural transformation - 몇 몇 박테리아는 특별한 처리 없이 DNA를 교환한다. -single strand dna artifical transformation -single and double strand dna - chemical treatme.. 2009. 11. 13. 암세포(cancer cell) 관찰 introduction (mitosis, meiosis) methods cell을 10ul씩 따서 slide glass에 올린다. cell을 얇게 펴서 말린다 methanol로 고정 마르면 giemsa solution 으로 염색15min pbs로 washing x2 현미경으로 관찰 result x200 x800 discussion 이번실험은 암세포의 MITOSIS 관찰이었다. 정상세포의 MITOSIS는 DNA의 복제후 핵분열과 세포질 분열과정을 통해 동일한 크기, 형태 염색체의 수 유전물질을 가진 세포의 수를 정상적인 범위 내로 늘려준다. 그리고 텔로미어 라고하는 DNA의 양끝의 DNA의 조각들이 세포분열이 여러차례 진행되고, 텔로미어 DNA가 손실되면 더이상 세포분열을 할 수없다. 그에 반해 암세포는 .. 2009. 11. 4. 골프 경기 규칙 라운드를 시작하기 전에 •스코어 카드나 게시판에 있는 로컬 룰을 읽어 본다. •볼에 식별 마크를 한다. 많은 골퍼들이 같은 상표와 모델의볼을 사용하고 있는데 만일 자신의 볼을 식별할 수 없으면분실구로 간주된다(규칙12-2 및 27-1). •자신의 클럽 수를 세어 본다. 허용되는 클럽 수는 최대 14개까지다(규칙4-4). 라운드 중에 •자신의 파트너(즉 자신이 속한 편의 플레이어)나 자신의 캐디를 제외한 누구로부터도 “어드바이스”를 구하지 않는다. 자신의 파트너를 제외한 누구에게도 어드바이스를 주지 않는다. 그리고 규칙, 해저드와 깃대까지의 거리 및 위치(규칙8-1) 등에 관한 정보는 물을 수 있다. •한 홀의 플레이 도중에 어떤 연습 샷도 하지 않는다. 라운드 끝에 •매치 플레이에서는 매치의 결과가 게시.. 2009. 10. 14. 이전 1 2 3 4 5 6 ··· 9 다음
