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대학 과제 및 리포트/바이러스학 실험-생물학과6

면역침강법 immunoprecipitation 면역침강 기술의 장점은 관심있는 항원을 분리하여 더 측정하도록 해주는 것이다. 주어진 세포 또는 조직형 내 특정항원의 존재를 민감하게 측정할 수도 있다 세포 또는 조직을 분해하여 만든 추출물을 침강시킬 항원-항체 복합체를 형성하기 위하여 관심있는 항원에대한 항체를 혼합한다. 그러나 만약 항원 농도가 낮다면(주로 세포와 조직 추출물의 경우에), 항원=항체 복합체가 침전물 로 모이는데는 몇 시간, 심지어는 며칠이 소요될 수도 있으며, 형성된 소량의 면역 침전물을 분리하는것이 어렵다. 이러한 한ㄲ께를 피하는 몇가지 방법이 있다. 그 중 한 방법은 원심분리기에 의해 항원-항체를 부착시키는 것이다. 또 다른 방법은, 1차 항체에대해 특이적인 2차 항체를 첨가하여 항원-항체 복합체를 결합시키는 것이다. 만약 2차 .. 2011. 5. 26.
Transfection Transfection DNA를 culture 중인 cell 내로 유입시켜 외부 DNA가 세포 내에서 발현되도록 하는 것이 transfection의 목적이다. DNA는 negative charge를 띄는 분자이고 cell membrane 또한 negative charge를 띈다. 따라서 DNA를 cell 속으로, 더구나 핵 속으로 까지 유입 시키는 것은 여러 가지 특별한 agent를 사용한다, 높은 tranfection efficiency를 얻는 것이 모든 실험의 관건이다. DNA를 cell 내로 유입 시키는 방법은 크게 chemical method, physical method, virus mediated method 등 3가지로 분류할 수 있다. Chemical method 에는 calcium-pho.. 2011. 4. 9.
plaque assay, PFU 계산 결과 24 well plate EPC cell u-tube pipet virus (IHNV, VHS CJB) crystal violet PEG methyl cellulose overlay 24 well plate 에cell seeding clean bench 에서 virus infection (IHVN, VHS CJB) 10^1~10^8 까지 희석시킴( u-tube 8개 media 900ul, virus 100ul) 24well에 10^6~10^8 까지 희석시킨것을 넣음 PEG 처리 200ul incubation 15min methyl cellulose overlay 7day incubation media 버림 crystal violet staining 30min incubation 흐르는 물에 washing.. 2011. 4. 9.
colony, plaque 차이점, PFU 계산, 염색약( 생염색, vitla dye) plaque는 바이러스감염에 의해 세포가 용해된곳. 관찰위해 세포 염색을 하면 염색이 안된 부분 colony는 미생물 이 증식하여 육안확인 가능한 미생물집락. 색깔이 있는부분 plaque forming units (PFU). 계산시의 오류를 최소화하기 위하여 여러 희석 배수를 사용하며, plaque가 20-100개정도 형성되는 plate로 count하여 titer를 계산한다. PFU/mL = Plaque수×희석배수×mL로 환산한 접종량 예) 10-6 희석액 0.1mL에서 50개의 plaque가 관찰되었다면, stock 용액내의 바이러스 역가는 50×106×10 = 5×108 PFU/mL plaque counting을 더 용이하게 하기 위해 vital dye로 세포단층을 염색한다. 염색약의 종류로는 met.. 2011. 3. 27.
Plaque assay 실험 대상 및 보관용 바이러스 부유액 내의 총 바이러스입자 수나 감염성이 있는 바이러스입자(infectiousunit)의 농도를 정확하게 알아내는 것, 즉 바이러스 titer의 측정은 바이러스의 중화시험, 항바이러스제에 대한 감수성검사, 바이러스정제 시의 순수성 평가, 바이러스의 병인성 평가 시에도 가장 기본적이며 필수적인 실험이다. 바이러스 titer 의 측정 시 실험대상 바이러스용액을 배수 희석하여 세포단층, chick embryo, 또는 동물에 접종하여 바이러스 증식 여부를 관찰하게 되며 이러한 방법은 바이러스의 감염능을 측정하는 것이다. 바이러스 감염에 대한 host의 반응은 정량적으로 측정될 수도 있고, 또는 감염의 유, 무로 판단하는 all-or-none 방법으로 판단할 수 도 있 다 . 정량.. 2011. 3. 22.
animal cell culture, fish cell culture Introduction 조직배양은 유기체로부터 분리한 세포나 조직의 배양으로 배양배지에서 조직을 살아있고 성장가능하게 만드는 기술이다. 진핵세포는 대부분의 원핵생물들에 비해 배양하기가어렵다. 복잡한 media를 요구하고, 박테리아, 효모 및곰팡이와 같은 미생물에 의해 오염되기 쉽다. cell culture 에 쓰이는 기본적 media에는 아미노산,비타민,무기염류,당류,탄산수소나트륨이 들어간 기본합성배지에 FBS와 같은 혈청, 세균증식억제를 위한 항생제가 들어간다. DMEM(Dulbeco"s Modified Eagle"s Medium)은 가장 일반적으로 사용되는 animal cell culture용 media이다. 진핵세포 배양에는 세종류가 있는데 Primary cells, Secondary cells, .. 2011. 3. 22.

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